امیر آراسته؛ ذوالفقار لطفی؛ محمد فضیلتی؛ حبیب‌اله ناظم
دوره 6، شماره 3 ، اسفند 1396، ، صفحه 11-25
چکیده
آنزیم اورهآز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولازها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز میکند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیتهای تشخیص اوره، صنایع نوشابهسازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشتههای آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی بهعنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم ...
بیشتر
آنزیم اورهآز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولازها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز میکند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیتهای تشخیص اوره، صنایع نوشابهسازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشتههای آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی بهعنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم اورهآز استفاده شد. تولید نانو رشتههای آمیلوئیدی با سه تکنیک طیفسنجی کنگورد، اسپکتروفلوریمتری و اسپکتروپلاریمتری بهینهسازی شده و رشتههای حاصله با تصاویر میکروسکوپ الکترونی مورد تأیید قرار گرفتند. سپس آنزیم اورهآز با استفاده از مولکولهای گلوتارآلدهید و با ایجاد پلهای عرضی روی رشتههای آمیلوئیدی تثبیتشده و فاکتورهای سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند. بیشترین میزان تولید رشتههای آمیلوئیدی پس از 48 ساعت انکوباسیون آلبومین سرم گاوی با غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر و دمای 70 درجه سانتیگراد در بافر سیترات-فسفات با pH برابر 4 بهدست آمد. آنزیم تثبیتشده نسبت به شکل آزاد دارای قابلیت نگهداری و پایداری بیشتری بود و فعالیت ویژه بالاتر و نیز Km کوچکتری را نشان داد. دمای بهینه از 40 به 70 درجه سانتیگراد و pH بهینه نیز از 6 تا 7 به 6 تا 9 در آنزیم تثبیتشده بهبود یافت. بنابراین رشتههای آمیلوئیدی با داشتن گروههای شیمیایی مختلف، برای تثبیت آنزیم اورهآز مناسب بودهاند. بهبود ویژگی‌های سینتیکی و پایداری آنزیم اورهآز در اثر تثبیت بر رشتههای آمیلوئیدی امکان استفاده گستردهتر از این آنزیم را در صنایع مرتبط فراهم میآورد.
امیر آراسته؛ ذوالفقار لطفی؛ محمد فضیلتی؛ حبیب اله ناظم
دوره 6، شماره 2 ، آذر 1396، ، صفحه 127-137
چکیده
رشتههای آمیلوئیدی دستهای از نانو رشتههای پروتئینی هستند که در آن پروتئین طبیعی به رشتههای متراکم تبدیل شدهاند. تجمع میتواند بیماریزا و یا غیربیماریزا باشد. اخیرا این رشتهها با توجه به ساختار منحصر به فردی که دارند، برای تولید نانومواد زیستی مورد توجه قرار گرفتهاند. در این مطالعه از آلبومین سرم گاوی بهعنوان ...
بیشتر
رشتههای آمیلوئیدی دستهای از نانو رشتههای پروتئینی هستند که در آن پروتئین طبیعی به رشتههای متراکم تبدیل شدهاند. تجمع میتواند بیماریزا و یا غیربیماریزا باشد. اخیرا این رشتهها با توجه به ساختار منحصر به فردی که دارند، برای تولید نانومواد زیستی مورد توجه قرار گرفتهاند. در این مطالعه از آلبومین سرم گاوی بهعنوان یک پروتئین مدل برای بهینهسازی فرایند فیبریل زایی استفاده شد. غلظتهای 2-10 میلیگرم بر میلیلیتر در بافر با pHهای مختلف 3-7 تهیهشده و برای دوره‌های صفر تا 48 ساعت در دمای 30-70 درجه سانتیگراد قرار گرفتند و میزان تولید رشتههای آمیلوئیدی با روش اسپکتروفوتومتری، فلوریمتری و دورنگ نمایی دورانی بررسی شد. طیفهای حاصل از روش جذبسنجی کنگورد بر اساس میزان طول موج ماکزیمم و جذب در طول موج ماکزیمم با نمونه حاوی رنگ کنگورد مقایسه شد. غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر از پروتئین که برای 48 ساعت در بافر با 4pH= و در دمای 50 درجه سانتیگراد قرار داشتند، بیشترین میزان آمیلوئید را تولید کردند. شرایط بهینه با روش فلورسانس ThT و دورنگ نمایی در غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر، 4pH=، دمای 70 درجه سانتیگراد و زمان 48 ساعت بهدست آمد. حضور رشتهها با تصاویر میکرسکوپ الکترونی گذاره تأیید شد. ساختار نامحلول و ابعاد رشتههای آمیلوئیدی آنها را بهعنوان نانو مواد زیستی جدید معرفی میکند. بهینهسازی تولید این ساختارها، مجال تولید آنها را در مقیاسهای بالاتر فراهم میآورد.
