با همکاری مشترک دانشگاه پیام نور و انجمن فیزیولوژی و فارماکولوژی ایران

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه ‏آزاد اسلامی، تهران، ایران

2 مرکز تحقیقات فناوری سلول‌های بنیادی، دانشگاه ‏علوم‌پزشکی شیراز، شیراز، ایران

3 گروه سلول‌های بنیادی و زیست‌شناسی تکوینی، ‏مرکز تحقیقات علوم سلولی، موسسه زیست‌شناسی ‏و فناوری سلول‌های بنیادی رویان، ‏ACECR، ‏تهران، ایران

10.30473/eab.2023.68842.1921

چکیده

انجماد یک روش نگه‌داری طولانی مدت تخمک می‌باشد که در روش‌های کمکی باروری نقش مهمی دارد. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر دو محلول انجمادی و دوستاکسل بر تغییر بیان ژن‌های اتوفاژی همچون Atg5 و Beclin-1 در تخمک MII موش سوری پس از انجماد شیشه‌ای با روش کرایوتاپ می‌باشد. برای رسیدن به این هدف، تخمک‌های MII موش سوری جمع‌آوری شده و در دو غلظت متفاوت از محلول‌های انجمادی اتیلن گلیکول 15%، دی متیل سولفوکساید 15% و سوکروز 5/0 مولار در گروه (VS1)A و اتیلن گلیکول 5/7 %، گلیسرول 5/7 % و سوکروز 5/0 مولار در گروه (VS2)B منجمد شدند و برخی از گروه‌ها قبل از انجماد تحت تاثیر دوستاکسل قرار گرفتند. پس از ذوب، تخمک‌ها لقاح داده شدند. درصد زنده‌مانی و لقاح تخمک‌های منجمد و ذوب شده ارزیابی و تغییر بیان ژن‌های (Atg5 و Beclin-1) با روش RT-PCR بررسی شد. نتایج نشان داد تفاوت‌های معنی‌داری بین درصد بقا و درصد لقاح گروه‌های انجمادی در مقایسه با گروه کنترل وجود دارد (P<0.05). درصد زنده‌مانی و لقاح در گروه VS1 نسبت به گروه VS2 کاهش یافت. همچنین درصد زنده‌مانی و لقاح گروه‌های پیش انکوبه شده با دوستاکسل بیشتر از گروه‌های انکوبه نشده بود. این مطالعه نشان داد انجماد شیشه‌ای با کرایوتاپ، ترازهای نسخه‌برداری ژن‌های اتوفاژی را در اووسیت‌های MII منجمد ذوب شده تغییر می‌دهد همچنین پیش انکوبه کردن اووسیت با دوستاکسل قبل از انجماد شیشه‌ای می‌تواند تراز نسخه‌برداری Atg5 و Beclin-1 را در گروه‌های آزمایشی کاهش دهد و در بالا بردن درصد بقا و درصد تشکیل جنین‌های دو سلولی موثر واقع شود.

کلیدواژه‌ها

موضوعات

Abedpour, N., & Rajaei, F. (2015). Vitrification by cryotop and the maturation, fertilization, and developmental rates of mouse oocytes. Iranian Red Crescent Medical Journal17(10).
Bissery, M. C. (1995). Preclinical pharmacology of docetaxel. European Journal of Cancer31, S1-S6.
Boiso, I., Martí, M., Santaló, J., Ponsá, M., Barri, P. N., & Veiga, A. (2002). A confocal microscopy analysis of the spindle and chromosome configurations of human oocytes cryopreserved at the germinal vesicle and metaphase II stage. Human reproduction17(7), 1885-1891.
Bouquet, M., Selva, J., & Auroux, M. (1992). The incidence of chromosomal abnormalities in frozen—thawed mouse oocytes after in-vitro fertilization. Human Reproduction, 7(1), 76-80.
Chasombat, J., Nagai, T., Parnpai, R., & Vongpralub, T. (2015). Pretreatment of in vitro matured bovine oocytes with docetaxel before vitrification: effects on cytoskeleton integrity and developmental ability after warming. Cryobiology, 71(2), 216-223.
Ciotti, P. M., Porcu, E., Notarangelo, L., Magrini, O., Bazzocchi, A., & Venturoli, S. (2009). Meiotic spindle recovery is faster in vitrification of human oocytes compared to slow freezing. Fertility and Sterility91(6), 2399-2407.
Dehghani, N., Dianatpour, M., Hosseini, S. E., Khodabandeh, Z., & Daneshpazhouh, H. (2019). Overexpression of mitochondrial genes (mitochondrial transcription factor A and cytochrome c oxidase subunit 1) in mouse metaphase II oocytes following vitrification via cryotop. Iranian Journal of Medical Sciences44(5), 406.
Devillard, L., Vandroux, D., Tissier, C., Dumont, L., Borgeot, J., Rochette, L., & Athias, P. (2008). Involvement of microtubules in the tolerance of cardiomyocytes to cold ischemia-reperfusion. Molecular and cellular biochemistry307, 149-157.
Gueritte-Voegelein, F., Guenard, D., Lavelle, F., Le Goff, M. T., Mangatal, L., & Potier, P. (1991). Relationships between the structure of taxol analogs and their antimitotic activity. Journal of medicinal chemistry34(3), 992-998.
Huang, J. Y., Chen, H. Y., Park, J. Y. S., Tan, S. L., & Chian, R. C. (2008). Comparison of spindle and chromosome configuration in in vitro-and in vivo-matured mouse oocytes after vitrification. Fertility and Sterility90(4), 1424-1432.
Klionsky, D. J., & Emr, S. D. (2000). Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation. Science290(5497), 1717-1721.
Klionsky, D. J., Cuervo, A. M., & Seglen, P. O. (2007). Methods for monitoring autophagy from yeast to human. Autophagy3(3), 181-206.
Khodabandeh Jahromi, Z., Amidi, F., Nori Mugehe, S. M. H., Sobhani, A., Mehrannia, K., Abbasi, M., ... & Ebrahimi, M. (2010). Expression of heat shock protein (HSP A1A) and MnSOD genes following vitrification of mouse MII oocytes with cryotop method. Cell Journal (Yakhteh)12(1), 113-119.
Kuwayama, M. (2007). Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: the Cryotop method. Theriogenology, 67(1), 73-80.
Liu, R. H., Sun, Q. Y., Li, Y. H., Jiao, L. H., & Wang, W. H. (2010). Effects of cooling on meiotic spindle structure and chromosome alignment within in vitro matured porcine oocytes. Molecular Reproduction and Development: Incorporating Gamete Research, 65(2), 212-218.
Mizushima, N. (2007). Autophagy: process and function. Genes & development21(22), 2861-2873.
Morató, R., Izquierdo, D., Albarracín, J. L., Anguita, B., Palomo, M. J., Jiménez‐Macedo, A. R., ... & Mogas, T. (2008). Effects of pre‐treating in vitro‐matured bovine oocytes with the cytoskeleton stabilizing agent taxol prior to vitrification. Molecular Reproduction and Development: Incorporating Gamete Research75(1), 191-201.
Roozbehi, A. (2013). Mouse oocytes and embryos cryotop-vitrification using low concentrated solutions: Effects on meiotic spindle, genetic material array and developmental ability. Iranian journal of basic medical sciences, 16(4), 590.
 Soyoung, B., Hyejin, Sh., Haengseok, S., Chang, S S., Hyunjang, J L (2014). Autophagic activation in vitrified-warmed mouse oocytes. National library of medicine,148(1), 9-11.
Schmidt, D. W., Nedambale, T. L., Kim, C., Maier, D. B., Yang, X. J., & Tian, X. C. (2004). Effect of cytoskeleton stabilizing agents on bovine matured oocytes following vitrification. Fertility and Sterility82, S26.
Shi, W. Q., Zhu, S. E., Zhang, D., Wang, W. H., Tang, G. L., Hou, Y. P., & Tian, S. J. (2006). Improved development by Taxol pretreatment after vitrification of in vitro matured porcine oocytes. Reproduction131(4), 795-804.
Sparreboom, A., van Tellingen, O., Nooijen, W. J., & Beijnen, J. H. (1998). Preclinical pharmacokinetics of paclitaxel and docetaxel. Anti-cancer drugs9(1), 1-17.
Yue, Z., Jin, S., Yang, C., Levine, A. J., & Heintz, N. (2003). Beclin 1, an autophagy gene essential for early embryonic development, is a haploinsufficient tumor suppressor. Proceedings of the National Academy of Sciences, 100(25), 15077-15082.
Zhou, C. J., Wang, D. H., Niu, X. X., Kong, X. W., Li, Y. J., Ren, J., ... & Liang, C. G. (2016). High survival of mouse oocytes using an optimized vitrification protocol. Scientific reports6(1), 19465.