امیر آراسته؛ سمیرا وزیری؛ محمد فضیلتی؛ حبیبالله ناظم
دوره 7، شماره 1 ، شهریور 1397، ، صفحه 55-72
چکیده
چکیده آمیلوئیدها در شرایط غیرطبیعیکننده از پروتئینهای مختلف به وجود میآیند. سطح بسیار فعال، این مواد را بهعنوان بستری برای تثبیت آنزیم مناسب میسازد. هدف از این مطالعه تولید رشتههای آمیلوئیدی و بررسی امکان استفاده از آنها بهعنوان بستر برای تثبیت آنزیم بوده است. برای تولید حداکثر میزان آمیلوئید از روش ...
بیشتر
چکیده آمیلوئیدها در شرایط غیرطبیعیکننده از پروتئینهای مختلف به وجود میآیند. سطح بسیار فعال، این مواد را بهعنوان بستری برای تثبیت آنزیم مناسب میسازد. هدف از این مطالعه تولید رشتههای آمیلوئیدی و بررسی امکان استفاده از آنها بهعنوان بستر برای تثبیت آنزیم بوده است. برای تولید حداکثر میزان آمیلوئید از روش پاسخ سطح1 استفاده شد و نتایج طیف سنجی کنگورد و دورنگنمایی دورانی2 با نرمافزار Design Expert 7 (Trial version) تحلیل شد و از میکروسکوپ الکترونی گذاره برای تایید حضور رشتههای آمیلوئیدی استفاده گردید. فرایند تثبیت با گلوتارالدهید و با ایجاد پلعرضی بین آنزیم و رشتههای آمیلوئیدی انجام شد و فاکتورهای سینتیکی در آنزیم آزاد و تثبیتشده شامل فعالیت، فعایت ویژه، دما و pH بهینه و پایداری حرارتی باهم مقایسه شدند. بیشترین میزان آمیلوئید پس از 6/72 ساعت بههم زدن آلبومین سرم گاوی با غلظت 35/4 میلیگرم بر میلیلیتر در بافر میکس سیترات-فسفات با 49/4=pH و دمای 80 درجه بهدست آمد و لیپاز تثبیتشده در فعالیت، فعالیت ویژه، Km و Vmax، دما و pH بهینه و پایداری حرارتی در دمای 40 درجه نسبت به لیپاز آزاد برتری سینتیکی نشان داد. رشتههای آمیلوئیدی بهعنوان موادی غنی از گروههای شیمیایی، میتوانند برای تثبیت آنزیمها مناسب باشند. این زمینه پروتئینی میتواند کاندیدای مناسبی در شرایط inVivo بهعنوان بستری زیستسازگار در تثبیت آنزیمها باشد. آمیلوئیدها با قطر کمتر از 100 نانومتر بهعنوان نانو مواد جدید، نهتنها باعث افزایش پایداری لیپاز میشوند، بلکه سایر خواص سینتیکی آن را بهعنوان یک نانو-ماتریکس جدید تقویت میکنند.
امیر آراسته؛ ذوالفقار لطفی؛ محمد فضیلتی؛ حبیب اله ناظم
دوره 6، شماره 2 ، آذر 1396، ، صفحه 127-137
چکیده
رشتههای آمیلوئیدی دستهای از نانو رشتههای پروتئینی هستند که در آن پروتئین طبیعی به رشتههای متراکم تبدیل شدهاند. تجمع میتواند بیماریزا و یا غیربیماریزا باشد. اخیرا این رشتهها با توجه به ساختار منحصر به فردی که دارند، برای تولید نانومواد زیستی مورد توجه قرار گرفتهاند. در این مطالعه از آلبومین سرم گاوی بهعنوان ...
بیشتر
رشتههای آمیلوئیدی دستهای از نانو رشتههای پروتئینی هستند که در آن پروتئین طبیعی به رشتههای متراکم تبدیل شدهاند. تجمع میتواند بیماریزا و یا غیربیماریزا باشد. اخیرا این رشتهها با توجه به ساختار منحصر به فردی که دارند، برای تولید نانومواد زیستی مورد توجه قرار گرفتهاند. در این مطالعه از آلبومین سرم گاوی بهعنوان یک پروتئین مدل برای بهینهسازی فرایند فیبریل زایی استفاده شد. غلظتهای 2-10 میلیگرم بر میلیلیتر در بافر با pHهای مختلف 3-7 تهیهشده و برای دورههای صفر تا 48 ساعت در دمای 30-70 درجه سانتیگراد قرار گرفتند و میزان تولید رشتههای آمیلوئیدی با روش اسپکتروفوتومتری، فلوریمتری و دورنگ نمایی دورانی بررسی شد. طیفهای حاصل از روش جذبسنجی کنگورد بر اساس میزان طول موج ماکزیمم و جذب در طول موج ماکزیمم با نمونه حاوی رنگ کنگورد مقایسه شد. غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر از پروتئین که برای 48 ساعت در بافر با 4pH= و در دمای 50 درجه سانتیگراد قرار داشتند، بیشترین میزان آمیلوئید را تولید کردند. شرایط بهینه با روش فلورسانس ThT و دورنگ نمایی در غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر، 4pH=، دمای 70 درجه سانتیگراد و زمان 48 ساعت بهدست آمد. حضور رشتهها با تصاویر میکرسکوپ الکترونی گذاره تأیید شد. ساختار نامحلول و ابعاد رشتههای آمیلوئیدی آنها را بهعنوان نانو مواد زیستی جدید معرفی میکند. بهینهسازی تولید این ساختارها، مجال تولید آنها را در مقیاسهای بالاتر فراهم میآورد.
