امیر آراسته؛ ذوالفقار لطفی؛ محمد فضیلتی؛ حبیب‌اله ناظم
دوره 6، شماره 3 ، اسفند 1396، ، صفحه 11-25
چکیده
آنزیم اورهآز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولازها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز میکند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیتهای تشخیص اوره، صنایع نوشابهسازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشتههای آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی بهعنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم ...
بیشتر
آنزیم اورهآز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولازها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز میکند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیتهای تشخیص اوره، صنایع نوشابهسازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشتههای آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی بهعنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم اورهآز استفاده شد. تولید نانو رشتههای آمیلوئیدی با سه تکنیک طیفسنجی کنگورد، اسپکتروفلوریمتری و اسپکتروپلاریمتری بهینهسازی شده و رشتههای حاصله با تصاویر میکروسکوپ الکترونی مورد تأیید قرار گرفتند. سپس آنزیم اورهآز با استفاده از مولکولهای گلوتارآلدهید و با ایجاد پلهای عرضی روی رشتههای آمیلوئیدی تثبیتشده و فاکتورهای سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند. بیشترین میزان تولید رشتههای آمیلوئیدی پس از 48 ساعت انکوباسیون آلبومین سرم گاوی با غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر و دمای 70 درجه سانتیگراد در بافر سیترات-فسفات با pH برابر 4 بهدست آمد. آنزیم تثبیتشده نسبت به شکل آزاد دارای قابلیت نگهداری و پایداری بیشتری بود و فعالیت ویژه بالاتر و نیز Km کوچکتری را نشان داد. دمای بهینه از 40 به 70 درجه سانتیگراد و pH بهینه نیز از 6 تا 7 به 6 تا 9 در آنزیم تثبیتشده بهبود یافت. بنابراین رشتههای آمیلوئیدی با داشتن گروههای شیمیایی مختلف، برای تثبیت آنزیم اورهآز مناسب بودهاند. بهبود ویژگی‌های سینتیکی و پایداری آنزیم اورهآز در اثر تثبیت بر رشتههای آمیلوئیدی امکان استفاده گستردهتر از این آنزیم را در صنایع مرتبط فراهم میآورد.
بهزاد شارقی*؛ سکینه صادقی کاجی
دوره 5، شماره 3 ، اسفند 1395، ، صفحه 1-8
چکیده
آنزیم اورهآز جزء خانواده آمیدو هیدرولازها (EC: 5. 1. 5. 3) می‌باشد که توسط گیاه لوبیای جک تولید می شود و این ارگانیسم را قادر می‌سازد که اوره را هیدرولیز و ایجاد آمونیاک و دی اکسید کربن نماید. مطالعات سینتیکی این آنزیم با استفاده از تکنیک اسپکتروفتومتری در ناحیه ماوراء بنفش در دمای oC 40 و در سه pH 5/5، 2/7 و 8 انجام گرفت. نتایج بهدست آمده نشان‌دهنده ...
بیشتر
آنزیم اورهآز جزء خانواده آمیدو هیدرولازها (EC: 5. 1. 5. 3) می‌باشد که توسط گیاه لوبیای جک تولید می شود و این ارگانیسم را قادر می‌سازد که اوره را هیدرولیز و ایجاد آمونیاک و دی اکسید کربن نماید. مطالعات سینتیکی این آنزیم با استفاده از تکنیک اسپکتروفتومتری در ناحیه ماوراء بنفش در دمای oC 40 و در سه pH 5/5، 2/7 و 8 انجام گرفت. نتایج بهدست آمده نشان‌دهنده سینتیک مهاری وابسته به pH اورهآز توسط پراکسید هیدروژن می‌باشد. بیش ترین اثر مهاری در pH بازی (8=pH) اتفاق افتاده و اثر مهاری پراکسید هیدروژن در pH اسیدی (5/5=pH) حداقل می‌باشد، در نتیجه پارامترهای سینتیکی Km و Vmaxآنزیم اورهآز که توسط معادله لینوریور-برگ در غیاب پراکسید هیدروژن محاسبه شده است، به‌ترتیب معادل 52/4 میلی‌مولار و 03/1 میلی‌مولار بردقیقه می‌باشند. در حضور پراکسید هیدروژن و با افزایش pH مقدار Km و Vmax به ترتیب افزایش و کاهش می‌یابند. همچنین نتایج نشان دادند که بوریک اسید و بتا مرکاپتو اتانول اثر حفاظتی در برابر مهارشدن آنزیم در 8=pH انجام می‌دهند. اثر حفاظتی بتامرکاپتواتانول در برابر پراکسید هیدروژن برای آنزیم اورهآز نسبت به بوریک اسید بیشتر می‌باشد، به‌طوری‌که بتامرکاپتواتانول و بوریک اسید در غلظت مشابه (30 میلی‌مولار) به‌ترتیب 90 و 80 درصد حفاظت در برابر پراکسید هیدروژن برای آنزیم اورهآز ایجاد نمودند.
