امیر آراسته؛ ذوالفقار لطفی؛ محمد فضیلتی؛ حبیباله ناظم
دوره 6، شماره 3 ، اسفند 1396، ، صفحه 11-25
چکیده
آنزیم اورهآز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولازها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز میکند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیتهای تشخیص اوره، صنایع نوشابهسازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشتههای آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی بهعنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم ...
بیشتر
آنزیم اورهآز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولازها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز میکند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیتهای تشخیص اوره، صنایع نوشابهسازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشتههای آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی بهعنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم اورهآز استفاده شد. تولید نانو رشتههای آمیلوئیدی با سه تکنیک طیفسنجی کنگورد، اسپکتروفلوریمتری و اسپکتروپلاریمتری بهینهسازی شده و رشتههای حاصله با تصاویر میکروسکوپ الکترونی مورد تأیید قرار گرفتند. سپس آنزیم اورهآز با استفاده از مولکولهای گلوتارآلدهید و با ایجاد پلهای عرضی روی رشتههای آمیلوئیدی تثبیتشده و فاکتورهای سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند. بیشترین میزان تولید رشتههای آمیلوئیدی پس از 48 ساعت انکوباسیون آلبومین سرم گاوی با غلظت 10 میلیگرم بر میلیلیتر و دمای 70 درجه سانتیگراد در بافر سیترات-فسفات با pH برابر 4 بهدست آمد. آنزیم تثبیتشده نسبت به شکل آزاد دارای قابلیت نگهداری و پایداری بیشتری بود و فعالیت ویژه بالاتر و نیز Km کوچکتری را نشان داد. دمای بهینه از 40 به 70 درجه سانتیگراد و pH بهینه نیز از 6 تا 7 به 6 تا 9 در آنزیم تثبیتشده بهبود یافت. بنابراین رشتههای آمیلوئیدی با داشتن گروههای شیمیایی مختلف، برای تثبیت آنزیم اورهآز مناسب بودهاند. بهبود ویژگیهای سینتیکی و پایداری آنزیم اورهآز در اثر تثبیت بر رشتههای آمیلوئیدی امکان استفاده گستردهتر از این آنزیم را در صنایع مرتبط فراهم میآورد.